ELISA實驗時,樣本處理的基本步驟
因樣本類型而異,以下是常見樣本的標準操作流程及注意事項:
一、血清樣本
采集與靜置:使用無抗凝劑試管采集血液,室溫靜置1小時或4℃過夜(傾斜放置可加速析出)。
離心:4℃條件下1000×g離心15-20分鐘,收集上清液。
保存:分裝后-20℃/-80℃保存,避免反復(fù)凍融。
二、血漿樣本
抗凝處理:使用EDTA、肝素鈉等抗凝劑采血管,采集后30分鐘內(nèi)完成離心。
離心條件:4℃、1000×g離心15分鐘,避免溶血或高脂樣本。
三、細胞培養(yǎng)上清
直接1000×g離心20分鐘去除細胞碎片,上清液分裝凍存。
四、細胞裂解液
裂解方法:反復(fù)凍融或超聲破碎,加入蛋白酶抑制劑。
離心:1500×g離心10分鐘去除碎片。
五、組織勻漿
預(yù)處理:冰浴中勻漿,按1:9(組織重量體積)比例處理。
離心:5000×g離心5-10分鐘取上清。
關(guān)鍵注意事項:
避免溶血、細菌污染及反復(fù)凍融。
特殊樣本需專業(yè)采集。
不同樣本需根據(jù)試劑盒要求調(diào)整處理細節(jié)。
注:以上僅供參考,不作為實際數(shù)據(jù),實驗需嚴格遵循說明或咨詢技術(shù)老師。
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