以下是天正信達(dá)人轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGF-β1) ELISA試劑盒? 的標(biāo)準(zhǔn)化說(shuō)明及操作指南：

　　BS-0089  人轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGF-β1)ELISA試劑盒

　　一、檢測(cè)原理

　　采用 ?雙抗體夾心法?：

　　預(yù)包被抗人TGF-β1抗體的微孔板捕獲樣本中的目標(biāo)蛋白

　　加入標(biāo)記的檢測(cè)抗體，形成“抗體-抗原-酶標(biāo)抗體"復(fù)合物

　　HRP催化TMB顯色，450nm波長(zhǎng)測(cè)定OD值，濃度與吸光度正相關(guān)

　　二、核心參數(shù)

　　項(xiàng)目? ?規(guī)格?

　　檢測(cè)范圍? 31.25-2000pg/mL(部分品牌62.5-4000pg/mL)

　　靈敏度? ≤18.75pg/mL 或 11.86pg/mL

　　樣本類型? 血清、血漿(EDTA/肝素抗凝)、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿

　　變異系數(shù)? 板內(nèi)/板間CV均<10%

　　回收率? 83-108%(血清/血漿)

　　三、試劑盒組成

　　預(yù)包被微孔板?：96T或48T配置

　　標(biāo)準(zhǔn)品?：凍干粉(400ng/mL起始濃度)

　　檢測(cè)抗體?：標(biāo)記抗TGF-β1抗體

　　顯色系統(tǒng)?：TMB底物A/B、終止液(2M硫酸)

　　洗滌緩沖液?：需蒸餾水稀釋

　　四、實(shí)驗(yàn)步驟

　　1. ?樣本處理?

　　血清/血漿?：2000-3000rpm離心20分鐘，避免溶血

　　組織樣本?：PBS勻漿后離心取上清

　　保存條件?：-20℃分裝，避免反復(fù)凍融(≤3次)

　　2. ?標(biāo)準(zhǔn)曲線制備?

　　凍干標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶后梯度稀釋(如2000→31.25pg/mL)

　　3. ?檢測(cè)流程?

　　加樣：標(biāo)準(zhǔn)品/樣本50μL/孔，37℃孵育120分鐘

　　洗滌：6次，扣干殘液

　　加酶標(biāo)抗體：100μL/孔，37℃ 60分鐘

　　顯色：TMB避光反應(yīng)15分鐘→終止液終止

　　讀值：450nm主波長(zhǎng)，630nm參比

　　五、注意事項(xiàng)

　　質(zhì)量控制?

　　每板需設(shè)空白孔和標(biāo)準(zhǔn)曲線孔

　　標(biāo)準(zhǔn)曲線R2應(yīng)≥0.99

　　操作規(guī)范?

　　試劑使用前需平衡至室溫

　　避免底物接觸金屬離子或氧化劑

　　數(shù)據(jù)解讀?

　　OD值超出標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍需稀釋復(fù)測(cè)

　　六、常見(jiàn)問(wèn)題

　　邊緣效應(yīng)?：預(yù)溫育板條至37℃可減少孔間差異

　　顯色異常?：檢查TMB是否避光保存，HRP是否失活

　　注：不同品牌組分可能差異(如預(yù)包被板/凍干抗體)，需嚴(yán)格按說(shuō)明書操作。

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